[Biochemie] SDS-PAGE probleem
 

Bij de bereiding van de stacking en running gel heb ik een probleem. De oplossing van acrylamide/bisachrylamide wilt namelijk niet polymeriseren. Zelfs de verhoging van de hoeveelheid initiator ammoniumpersulfaat heeft geen invloed. Een grotere hoeveelheid TEMED baat ook niet. Alle basisoplossingen die we gebruiken zijn goed (vers bereid). Weet iemand waar dit aan kan liggen?

Ik weet het niet...ik zal wel ff overtypen wat er bij ons stond, misschien kun je er dan zelf een verschil uit opmaken:

3300 microL 30% acryl/bisacryl amide
2500 microL 1.5 M tris HCl pH 8.8
3900 microL H₂O
100 microL 10% SDS
Meng dit voorzichtig, zorg dat er geen luchtbellen ontstaan.
Dan:
100 microL 10% APS
5 microL TEMED
Meng voorzichtig. Giet de gel tot aan de merkstreep. Pipetteer 1-2 ml H₂O voorzichtig op de gel en laat 'm polymeriseren. (45 min).

(dat was de separation gel)

Het probleem is al verholpen. Het ammoniumpersulfaat was niet goed. Bedankt voor de reply in ieder geval.