[biochemie] PCR vraag

[Taeke]

Binden de primers zich tijdens de annealing stap zich nu covalent aan het DNA of alleeen via H-bruggen?

Voor zover ik weet gewoon via H-bruggen, net als DNA aan zichzelf bindt. Lijkt me ook wel logisch, hoe zou het anders moeten?

Maar.. de annealing stap? Wat is dat?

Edit: ow laat maar.. renatureren... ofzo.

Maar ik blijf bij m'n antwoord.

[Taeke]

Alicia Silverstone schreef op 12-12-2003 @ 12:28:
Voor zover ik weet gewoon via H-bruggen, net als DNA aan zichzelf bindt. Lijkt me ook wel logisch, hoe zou het anders moeten?

Maar.. de annealing stap? Wat is dat?

Edit: ow laat maar.. renatureren... ofzo.

Maar ik blijf bij m'n antwoord.

Ja dank je. Ik was even aan het twijfelen doordat ik twee verslagen had waarin beide antwoorden stonden, de docent had het allebei goedgekeurd en nu wist ik het even dus niet meer , maar nu wel . thx

[Keith]

ik zit dit nu te lezen en ben compleet vergeten wat primers ook al weer zijn!

[Maarten]

Een primer is een complementair stuk DNA. Primers zijn noodzakelijk om DNA te amplificeren omdat de polymerase slechts nucleotiden aan elkaar kan koppelen . Indien er niet al nucleotides aanwezig zijn is is er geen fundament vanwaaruit de polymerase te werk kan gaan zeg maar.

PCR gaat zo in ze werk:

Eerst heb je dubbelstrengs DNA

A C T G C A C T G C A C T G C
T G A C G T G A C G T G A C G

Vervolgens wordt dit verhit, nu krijg je twee losse strengen DNA

T G A C G T G A C G T G A C G

en

A C T G C A C T G C A C T G C

Je moet dan voor elk van beide strengen een primer maken, in de werkelijkheid is het lastiger omdat je rekening moet houden met de richting (5' en 3' of 3' en 5') maar dit moet je maar even achterwege laten.

T G A C G T G A C G T G A C G

De primer van dit streng is

A C T (eigenlijk moet het wat langer zijn, zodat het stabieler gebonden is en niet op andere plaatsen kan binden die toevallig ook de sequentie TGA bevatten maar dat maakt voor nu even niet uit)

T G A C G T G A C G T G A C G
A C T

Nu is de primer gebonden en kan de polymerase te werk gaan en nucleotide (die aanwezig moeten zijn in het buffer) gaan toevoegen en dus zo het DNA vermenigvuldigt

T G A C G T G A C G T G A C G
A C T G

1 nucleotide overgeschreven

T G A C G T G A C G T G A C G
A C T G C A C T G C

5 nucleotides overgeschreven

T G A C G T G A C G T G A C G
A C T G C A C T G C A C T G C

Enzovoort

Ik hoop dat ik het nu duidelijker gemaakt heb, in plaats van vager

Overigens is het mij duidelijk geworden dat men in schoolboeken niet echt duidelijk is met het verschil tussen dubbelstrengs DNA en het feit dat je erfelijke informatie dubbel aanwezig is. Dit moet je goed van elkaar scheiden! Dit is niet hetzelfde namelijk.